Кумасси для кол. опр-я белка / Coomassie Brilliant Blue Liquid Reagent for Quantitative Determination of Protein, Servicebio, Китай

Кумасси G250 обладает максимальным поглощеним 488 нм в свободном состоянии. После связывания с белком максимальное поглощение изменяется до 595 нм. Значение оптического поглощения пропорционально содержанию белка, данный реактив можно использовать для количественного определения белка.

Перед использованием продукт следует довести до комнатной температуры и перемешать, чтобы не повлиять на чувствительность обнаружения.

В целях безопасности и здоровья надевайте защитные очки, перчатки или защитную одежду.

Подготовка для тестирования: образец белка, подлежащий тестированию, разбавляется соответствующим образом (концентрация белка в образце может быть определена перед экспериментом и находится в пределах диапазона стандартной кривой, чтобы обеспечить надежность результата теста). 20 мкл каждого образца добавляют в 96-луночный планшет. Тестируемый образец следует развести в том же растворе, что и стандарт белка.

Детектирование: в каждую лунку добавляют 200 мкл раствора Кумасси бриллиантового голубого G250 и тщательно перемешивают (96-луночный планшет можно поместить на осциллятор на 30 с). Через 3-5 мин при комнатной температуре стандартная кривая № 0 используется в качестве эталона, колориметрическое измерение проводится при длине волны 595 нм и регистрируется значение оптической плотности каждой лунки.

Расчет: градиентное содержание белка (мкг/мл) на стандартной кривой принимается по оси абсцисс, а значение светопоглощения принимается за ординату для построения стандартной кривой в соответствии со значением поглощения белка. Концентрацию измеряемого образца в соответствующей лунке можно найти на стандартной кривой (мкг/мл), а затем умножить на разбавление образца и получить фактическую концентрацию белка в измеряемом образце.

Если для определения используется спектрофотометр, стеклянная пробирка или стеклянная колориметрическая пробирка используется в качестве реакционного сосуда для построения стандартных кривых. После надлежащего разведения тестируемого образца белка добавьте его в новый стеклянный тест — пробирку или колориметрическую пробирку с объемом образца 1 мл. Добавьте 3 мл раствора кумасси бриллиантового синего G250 в пробирку с градиентом стандартной кривой и пробирку с образцом, тщательно перемешайте, выдержите при комнатной температуре в течение 3-5 минут, затем используйте спектрофотометр для колориметрического обнаружения.

Обнаружение: длина волны спектрофотометра установливается на 595 нм, стандартная кривая и тестируемый образец обнуляются с помощью пробирки стандартной кривой № 0 в качестве эталона.